AHCC Giriş
Dünya çapında rahim ağzı kanseri kadınlarda en sık görülen dördüncü malignitedir ve morbidite ve mortalitenin başlıca nedenidir. Tüm kanserlerin yaklaşık %10’unu oluşturur ve her yıl dünya çapında 265.700 kadın bu hastalıktan ölür.
Yüksek riskli insan papilloma virüsü (HR-HPV) ile ilişkili olarak rahim ağzı kanserinin etiyolojisi tanımlanmış ve doğrulanmıştır. İnsan papilloma virüsü (HPV), genellikle kutanöz ve mukozal yüzeyler dahil olmak üzere epitelyal hücre tabakasını enfekte eden ve iyi huylu siğiller, in situ karsinom ve nihayetinde habis lezyonlarla ilişkili, zarflanmamış, çift sarmallı bir DNA virüsü olarak sınıflandırılır. HR-HPV enfeksiyonlarının süresi uzadıkça, hastaların serviks kanseri geliştirme riski artar.
Materyal ve Metot
Klinik Öncesi Çalışmalar
Hücre Kültürü ve AHCC
Tüm insan rahim ağzı kanseri hücre hatları C-33A (HPV negatif) ve CaSKi (HPV16 pozitif), HeLa (HPV 18 pozitif) ve SiHa (HPV16 ve HPV18 pozitif) Amerikan tipi kültür koleksiyonundan (ATCC, Manassas, VA) elde edildi. SiHa skuamöz hücreli karsinom, hela adenokarsinom ve C-33A karsinom hücre hatları, 1.5 g/l sodyum bikarbonat, 0.1 mM esansiyel olmayan amino asitler, 1.0 mM sodyum piruvat ve %10 FBS içerecek şekilde ayarlanmış 2 mM L-glutamin ve Earl’ün BSS’Sİ ile EMEM’DEN oluşan bir ortamda yayılmıştır. CaSKi epidermoid karsinom hücre hattı, 1.5 g/l sodyum karbonat, 4.5 g/l glikoz, 10 mM HEPES, 1.0 mM sodyum piruvat ve %10 FBS içerecek şekilde ayarlanmış 2 mM l-glutamin ile RPMI 1640’dan oluşan bir ortamda yayılmıştır. Tüm hücre hatları 75-cm2 kültür şişelerinde 37 °C ila 90% izdihamında havada %5 CO2 içinde yetiştirildi. Bu çalışma için kullanılan hücre çizgileri, hücre çizgilerinin özelliklerinde ciddi değişiklikleri önlemek için <15 pasajda tutuldu.
İlaç Çözümleri
AHCC 40 mg/mL stok çözeltisi, 600 mg AHCC tozunun 15 mL fosfat tamponlu salin (PBS) içinde çözülmesiyle ve 0.2 µm şırınga filtresi ile sterilize edilen filtrelerle hazırlandı. Tüm ek dilüsyonlar, her hücre hattı için ilgili hücre kültürü ortamı ile gerektiği gibi tamamlanmıştır. MTT stok çözeltisi, 0.3 mg/ml’lik bir nihai konsantrasyon elde etmek için 54 mg MTT’Yİ 20 mL PBS’DE çözerek hazırlanmıştır. Her deney için yeni standartlar ve dilüsyonlar yapıldı.
HR-HPV’nin Açıklığını Değerlendirmek için In Vitro AHCC Çalışması
Büyüme inhibisyon testleri daha önce tarif edildiği gibi yapılmıştır. IC20 (%20 hücre ölümü elde etmek için inhibitör konsantrasyon) ve AHCC ve her hücre hattı için IC50 hesaplandı. Bu klinik öncesi araştırmanın tasarımı ve planlanması sırasında, ulaşılabilir AHCC insan sistemik plazma konsantrasyon verileri araştırmacılar için mevcut değildi.
Üreticinin talimatlarına göre 3 g toplam günlük dozun mevcut önerilen dozuna dayanarak, %100 biyoyararlanımı varsayarak ve ortalama yedi litrelik bir yetişkinin tahmini toplam kan hacmini kullanarak, ulaşılabilir en yüksek plazma konsantrasyonu, IC20 konsantrasyonunun altında olan 0.42 mg/mL olacaktır, bu nedenle hücre hatlarına sitotoksik değildir. Bu nedenle, tüm in vitro çalışmalar için, klinik olarak ilgili konsantrasyonun bir tahmini olarak 0.42 mg/mL konsantrasyonu seçildi.
Tüm deneyler dört kopya halinde yapıldı. Beş milyon hücre SiHa (HPV 16/18 pozitif) ve C-33A (HPV negatif), bir kez 72 saat boyunca AHCC (0.42 mg/mL) ile T25 şişelerinde tedavi edildi. IC20 konsantrasyonu, hücre canlılığını korumak için seçildi. Ancak HR-HPV enfeksiyonunu “temizlemek” için yeterince yüksek AHCC konsantrasyonu ile tedavi edilmeyen hücreler bir kontrol görevi gördü. Hücreler 24, 48 ve 72 saat zaman dilimlerinde hasat edildi. Aynı deney, her 24 saatte bir taze AHCC (0.42 mg/mL) ilavesiyle 7 gün boyunca tekrarlandı, daha sonra ek bir 7 gün boyunca gözlemlendi. Tedavi edilmeyen hücreler bir kontrol görevi gördü. Hücreler, çalışmanın takviye ve gözlem aşamaları sırasında toplam 24 gün boyunca her 14 saatte bir hasat edildi. DNA tüm örneklerden ekstrakte edildi ve aşağıda açıklandığı gibi PCR için kullanıldı.
TABLO 1 | İn vitro sitotoksisitenin özeti: Dört rahim ağzı kanseri hücre dizisi AHCC ile desteklenmiştir.
Klinik Çalışmalar
Pilot çalışmalar ve çalışma değişiklikleri (HSC-MS-12-0851), Houston’daki Texas Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi’nin Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylandı. Tüm hastalar, ilgili pilot çalışmaların her birine katılmak için bilgilendirilmiş onam imzaladılar.
Çalışma boyunca yaşam boyu cinsel partner sayısı, kontrasepsiyon yöntemleri ve periyodik gebelik testi de dahil olmak üzere hasta demografik bilgileri toplanmıştır. Katılımcılar, HR-HPV’Yİ temizlemek için 6 aydan 8 aya kadar aç karnına günde bir kez ağız yoluyla AHCC 1 g veya 5 haftadan 6 aya kadar aç karnına günde bir kez ağız yoluyla AHCC 3 g aldı. HR-HPV testi, AHCC 3 g çalışmasında CERVİSTA HPV DNA testi (APTİMA, Hologic, Bedford, MA) ile tamamlandı.
AHCC 1g çalışmasında hasta örnekleri başlangıçta HPV E6/E7 RNA testi (APTİMA, Hologic, Bedford, MA) ile test edildi ve daha sonra tüm HPV RNA negatif sonuçları doğrulandı veya COBAS HPV DNA testi (Roche Molecular Systems, INC, Branchburg, NJ). AHCC takviyesini durdurduktan sonra gözlem süresi boyunca hem HPV DNA hem de HPV RNA yöntemleri ile kalan HR-HPV negatif üzerinde dayanıklı bir yanıt tanımlanmıştır. Her iki çalışmada da, IgG ve IFN α/β/γ dahil olmak üzere bağışıklık belirteçleri, yukarıda açıklandığı gibi ELISA testleri ile izlendi.
Veri ve İstatistiksel Analiz
Klinik Öncesi Çalışmalar
Hayvan çalışması örneklem büyüklüğü tahminini belirlemek için “kaynak denklemi” yöntemi kullanılmıştır. Kısaca, eşit olan bir E-değeri hayvan sayısı eksi grup sayısı hesaplanır ve 10 ile 20 arasında olması sağlanır. Bu çalışmada, grup 1 (sağlıklı kontrol) ile 2 (AHCC), 1 ile 3 (araç kontrolü) ve 1 ile 4 (takviye kontrolü yok) arasında immün yanıtın yanı sıra HR-HPV durumunun bağımsız karşılaştırmaları yapıldı, dolayısıyla E=(10×2)−2=18, ki bu aralık içinde. Student t-test analizi, anlamlı kabul edilen 0.05’den küçük veya eşit p-değerleri ile cevap vermeyenlere cevap veren çalışma kolları arasındaki farkları değerlendirmek için kullanılmıştır.
Klinik Çalışma
Bu çalışmanın birincil sonucu, takviyenin başlamasından 6 ay sonra HR-HPV enfeksiyonu olmayan kadınların oranı olarak tanımlanan takviyelerin başarı oranıydı. Bu hasta popülasyonunda, kalıcı HR-HPV enfeksiyonları olan kadınlarda, HR-HPV enfeksiyonunun kendi başına beklenen klirensi sıfır ila %10’dur.
Kalıcı enfeksiyon, 2 yıldan fazla bir süre boyunca en az 6 ay arayla üç veya daha fazla ardışık HR-HPV pozitif test sonuçları ile teyit edilen >2 yıl boyunca sürekli olarak HR-HPV pozitifliği ile tanımlandı. Şu anda HR-HPV enfeksiyonlarını temizlemek için aktif bir takviye bulunmadığından, kalıcı enfeksiyonları olan bu kadınlarda HR-HPV enfeksiyonunun temizlenmesinde klinik olarak herhangi bir iyileşme klinik olarak anlamlı olacaktır.
Bu pilot çalışmanın mümkün olup olmadığını ve ek resmi çalışmaya değer olup olmadığını belirlemek için, hedef takviye başarı oranımız %25 veya daha fazlaydı. 0.05 güven düzeyinde, örneklem büyüklüğü ve buna bağlı istatistiksel güç belirlendi. Beklenen tahakkuk, bu çalışmaya en az 10 hasta ve en fazla 25 hasta idi ve daha sonra takviye tamamlandıktan sonra 1 ay (28 gün) boyunca hastaları takip etti. 6 aylık takviyeden sonra pozitif test yapan hastalar takviye yetmezliği olarak kabul edildi. Student t-test analizi, anlamlı kabul edilen 0.05’den küçük veya eşit p değerleri ile cevap vermeyenler arasındaki farkları değerlendirmek için kullanıldı.
Bulgular
Büyüme inhibisyon tahlillerinde, 72 saat süreyle AHCC ile takviye, 0,42 mg/mL’lik klinik olarak ilgili konsantrasyonda test edilen dört insan rahim ağzı kanseri hücre çizgisinin hiçbirinde herhangi bir hücre büyümesi inhibisyonu sağlamadı. Bununla birlikte, potansiyel doğrudan sitotoksisite, AHCC için %50 büyüme inhibisyonu (IC50) elde etmek için konsantrasyonun, dört insan servikal kanser hücre dizisinde 2.3 ila 4 mg / mL arasında değiştiği gözlendi, ancak bu, klinik olarak elde edilebilir sistemik konsantrasyonların çok üzerindedir. Bu sonuçlar Tablo 1’de özetlenmiştir.
72 saatlik inkübasyon için bir kerelik AHCC 0.42 mg/mL dozu ile takviye, ilk 24 saat boyunca HR-HPV ekspresyonunu bastırdı, ancak daha sonra HR-HPV ekspresyonu 48 saat boyunca geri yüklendi. C-33A (negatif kontrol) ve SiHa (HPV16 ve HPV18 pozitif) hücre hatları için sonuçlar Şekil 1A’da özetlenmiştir. C-33A HPV negatif kontrolüne kıyasla Sıha (HPV16+/18+) ‘ daki temsili sonuçlar Şekil 1B’de özetlenmiştir.
Şekil 1. (A) C-33A(HPV-) ve Sıha (HPV 16/18+) insan rahim ağzı kanseri hücre hatları, bir kerelik AHCC 0.42 mg/mL dozu ile in vitro olarak desteklendi ve daha sonra 72 saat boyunca inkübe edildi. HR-HPV 24 saat boyunca bastırılırken, 48 ve 72 saat sonra ekspresyonla belirgin bir şekilde temizlenmedi. NT, tedavi dışı kontrol. (B) C-33A(HPV-) ve Sıha (HPV16/18+) insan rahim ağzı kanseri hücre hatları, materyallerde ve yöntemlerde açıklandığı gibi 5 gün (120 saat) boyunca her 24 saatte bir günlük taze AHCC 0.42 mg/mL dozu ile in vitro olarak desteklendi. NT, tedavi dışı kontrol. Bu, SiHa hücre hattındaki HR-HPV ekspresyonunu ortadan kaldırmak için başarılı oldu.
İn vivo doğrulayıcı fare çalışmalarında, 90 gün boyunca günde bir kez ağızdan 50 mg/kg AHCC, 30 gün sonra devam eden HR-HPV ekspresyonunun temizlenmesi ile ilişkiliydi. Bu sonuçlar Şekil 2’de özetlenmiştir.
Şekil 2. Hayvan çalışmasında üç kol vardı: AHCC takviye kolu (N = 10), takviye kontrol kolu (N = 10) ve bir araç (otoklavlanmış su) kontrol kolu (N = 10). AHCC takviyesi kolu oral bir doz aldı (50 mg/kg, 0.25 mL, gastrik gavajda); no takviyesi kontrolünün çalışma müdahalesi yoktu ve araç kontrol kolu, sıfır günden başlayarak günde oral bir otoklavlanmış su dozu (0.25 mL, gastrik gavaj) aldı ve çalışmanın tamamlanmasına kadar devam etti (90.gün). TX1, tedavinin sonunda temsil eder ve TX2, ahcc takviyesinin durdurulmasından 30 gün sonra 90 çalışma gününü temsil eder. Tx1 ve TX2’DEKİ SiHa hücre hatlarında HR-HPV’nin olmaması, HR-HPV’nin temizlenmesini doğruladı. NT, tedavi dışı kontrol; VC, araç / plasebo kontrolü.
Tümörler fareden ziyade HR-HPV ile enfekte olduğundan, kronik enfeksiyonlarda tipik olarak yüksek olan interferon beta seviyeleri normaldi. Farelerde AHCC günlük takviyesinin etkisi çalışmalar, Tip II interferonu temsil eden IFN γ ve IgG seviyelerine odaklandı, bağışıklık tepkisi zamanla arttı ve insan rahim ağzı kanseri fare modelinde HR-HPV enfeksiyonlarının başarılı bir şekilde temizlenmesiyle ilişkiliydi. Bu sonuçlar Şekil 3A,B’de özetlenmiştir.
Şekil 3. Bu, viral enfeksiyonların temizlenmesiyle ilişkili IFN-γ, Tip II interferon ve viral enfeksiyonlara karşı bağışıklık tepkisi ile ilişkili IgG, 30 gün sonra ahcc 50 mg/kg takviyesi seviyelerini içeren hayvan çalışmalarından elde edilen immün belirteç verilerini temsil eder. Yöntem ve materyallerde açıklandığı gibi fare modellerinde günde bir kez. IFN-γ ve IgG seviyelerinde AHCC günlük takviyesi zamanla artmış ve SiHa (HPV 16/18+) fare modelinde HR-HPV enfeksiyonlarının başarılı bir şekilde temizlenmesi ile korele olmuştur. (A) IFN-γ seviye yanıtı (not: y ekseni 30 pg/ml’de başlar) p < 0.03 (B) IgG1 seviye yanıtı, p < 0.04.
İlk AHCC 3 g pilot çalışmasında, başlangıçta çalışmaya katılan hastalar, HR-HPV testi ve bağışıklık belirteçleri için kan örneklemesi için haftada bir kez dönen 5 haftaya kadar aç karnına günde bir kez AHCC 3 g aldı. Negatif test ettikten sonra, AHCC durduruldu ve HR-HPV testi AHCC takviyesini kapattıktan sonra tekrarlandı. Veri incelemesine dayanarak, takviye planı, ilk negatif sonuçtan sonra gerekli en az 1 aylık AHCC takviyesi ile aylık bir kez HR-HPV testi ve kan örneklemesi ile aç karnına günde bir kez AHCC 3 g’ye devam edecek şekilde değiştirildi. Bağışıklık tepkisi verilerine dayanarak, protokol en az 3 ay ve 6 aya kadar sürekli AHCC takviyesi gerektirecek şekilde yeniden değiştirildi ve ilk negatif sonucun ötesinde en az 1 ay AHCC gerektirdi. Çalışmaya toplam 10 HR-HPV + kadın alındı ve her gün AHCC 3 g aldı. Tüm katılımcılar 2 yıldan fazla bir süredir HR-HPV enfeksiyonlarını doğruladı ve kayıt sırasında tekrar doğrulandı. Pilot çalışmalarda spesifik HR-HPV suşu tiplemesi finansal olarak mümkün değildi. Hasta demografik bilgileri Tablo 2’de özetlenmiştir.
Tablo 2. AHCC pilot çalışmaları için hasta demografisinin özeti.
İki hasta, HR-HPV negatif yanıtı olmadan 5 hafta boyunca aç karnına her gün AHCC 3 g aldı ve ilk protokol tasarımına göre, minimum AHCC takviyesinin bağışıklık tepkisi verilerine dayanarak 3 aya kadar uzatıldığı protokol değişikliklerinden önce yapılan çalışma kaldırıldı. İki hasta, HR-HPV negatif yanıtı olmadan 2 ay boyunca aç karnına günlük olarak AHCC 3 g aldı ve IFNß seviyesi <25 pg/ml’ye ulaşmadan önce çalışmadan alındı. Bağışıklık tepkisi verilerine dayanarak, AHCC takviyesinin süresi 6 aya kadar uzatıldı. Kalan altı hasta, aç karnına günde bir kez en az 3 ay ve 6 aya kadar AHCC 3 g aldı (yemeklerden 1 saat önce veya 2 saat sonra). Bu altı hastadan dördü (%66.7), INF-β seviyesinin azalmasıyla temsil edilen kalıcı bir yanıt elde edebildi, daha sonra <25 pg/mL kaldı ve >30 gün boyunca HR-HPV DNA’sının olmadığını doğruladı (p < 0.05). IFN-β immün yanıtı, 25 pg/mL seviyesinin altındaki IFN-β seviyelerinin, kalıcı, HR-HPV enfeksiyonlarının başarılı, dayanıklı bir klirensi ile ilişkili olduğunu gösteren Şekil 4A’da özetlenmiştir. Tüm hastalar AHCC 3 g’yi her gün aç karnına iyi tolere ettiler ve hiçbir yan etki bildirmediler.
Şekil 4. (A) AHCC 3 g takviyesi (B) AHCC 1 g takviyesi. IFN-β, genellikle kronik viral enfeksiyonların virülansı ile ilişkili bir tip-1 IFN’DİR. Kronik viral enfeksiyonlar genellikle IFN-γ ve NK/T hücresi sitotoksik hücre bağışıklığının üretiminin baskılanmasına yol açan yüksek IFN-β seviyeleri ile ilişkilidir. Her iki pilot çalışmada da, 25 pg/mL seviyesinin altındaki ev sahibi IFN-β seviyelerinin ahcc takviyelerinin bastırılması gözlendi ve bu da sitotoksik hücre bağışıklığının kalıcı, yüksek riskli HR-HPV enfeksiyonlarının başarılı, uzun süreli klirensine modülasyonuna yol açtı.
Daha düşük bir AHCC takviyesi dozunun da etkili olup olmayacağını belirlemek için ayrı bir AHCC 1 g takip pilot çalışması başlatıldı. Hastalar en az 6 ve 8 aya kadar aç karnına günde 1 g AHCC aldı. >2 yıl boyunca doğrulanmış kalıcı HR-HPV enfeksiyonu olan on kadın kaydedildi. Hasta demografisi Tablo 2’de özetlenmiştir. Çalışma protokolüne uyulmaması nedeniyle bir hasta çalışma dışı bırakıldı, çalışmayı tamamlayan kalan dokuz hastanın 4’ü (%44), aç karnına günlük 7 aylık AHCC 1 g takviyesinden sonra HR-HPV klirensini doğrulayan 9 (%44) hastaydı. Yine IFNß bastırma <25 pg/mL, HR-HPV enfeksiyonunun başarılı bir şekilde temizlenmesi için bir belirteç olarak doğrulandı. (Şekil 4B) tüm hastalar AHCC 1 g takviyesini günlük olarak aç karnına iyi tolere ettiler ve hiçbir yan etki bildirmediler.
Sonuç
Bu çalışma, AHCC takviyelerinin HR-HPV enfeksiyonlarından etkili bir şekilde kurtulmak için konakçı bağışıklık tepkisini modüle ettiğini gösteren ilk ön çalışmadır. Diğer kronik viral enfeksiyonlara benzer şekilde, IFNß baskılanması, HR-HPV enfeksiyonunun uzun süreli klirensinin bir işareti olarak doğrulandı. AHCC 3 g, AHCC 1 g’den biraz daha hızlı ve daha tutarlı bir yanıt elde etti. Bu ön bulgular çok cesaret vericidir ve doğrulanmış HR-HPV+ enfeksiyonları olan 50 kadında devam eden faz II randomize, çift kör, plasebo kontrollü çalışmadan onay beklemektedir. Vadeli çalışmalar, HR-HPV ile ilişkili kanserlerin tedavisi için kemoterapi ile birlikte AHCC takviyesinin potansiyel rolüne odaklanacaktır.
NCBI. From Bench to Bedside: Evaluation of AHCC Supplementation to Modulate the Host Immunity to Clear High-Risk Human Papillomavirus Infections. 2019
Referanslar
1. American Cancer Society Global Burden of Cancer in Women: Current Status, Trends, and Interventions.
2. Lombard I, Vincent-Salomon A, Zafrani B, de la Rochefordiere A, Clough K, Favre M, et al. . Human papillomavirus genotype as a major determinant of the course of cervical cancer. J Clin Oncol. (1998) 16:2613–9.
3. Harris RWC, Brinton LA, Cowdell RH, Skegg DC, Smith PG, Vessey MP, et al. Characteristics of women with dysplasia or carcinoma in situ of the cervix uteri. Br J Cancer. (1980)
4. Furumoto H, Irahara M. Human papillomavirus (HPV) and cervical cancer. J Med Invest. (2002) 49:124–33.
5. Munoz N, Bosch FX, de Sanjose S, Herreor R, Castellsague X, Shah KV, et al. . Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer. N Engl J Med. (2003) 348:518–27.
6. Andrei G, Snoeck R, Piette J, Delvenne P, DeClercq E. Antiproliferative effects of acyclic nucleoside phosphonates on human papillomavirus (HPV)-harboring cell lines compared with HPV-negative cell lines. Oncol Res. (1998) 10:523–31.
7. Andrei G, Snoeck R, Schols D, De Clercq E. Induction of apoptosis by cidofovir in human papillomavirus (HPV)-positive cells. Oncol Res. (2000) 12:397–408.
8. Schiffman M, Wheeler CM, Castle PE. Human papillomavirus DNA remains detectable longer than related cervical cytologic abnormalities. J Infect Dis. (2002) 186:1169–72.
9. Uno K, Kosuna K, Sun B, Fujii H, Wakame K, Chikumaru S, et al. Active Hexose Correlated Compound (AHCC) improves immunological parameters and performance status of patients with solid tumors. Biotherapy. (2000) 14:303–9.
10. Gao Y, Zhang D, Sun B, Fujii H, Kosuna K, Yin Z. Active hexose correlated compound enhances tumor surveillance through regulating both innate and adaptive immune responses. Cancer Immunol Immunother. (2006) 55:1258–66.
11. Hirose A, Sato E, Fujii H, Sun B, Nishioka H, Aruoma OI. The influence of active hexose correlated compound (AHCC) on cisplatin-evoked chemotherapeutic and side effects in tumor-bearing mice. Toxicol Appl Pharmacol. (2007) 222:152–8.
12. Hunter RJ, Fujii H, Wakame K, Gaikwad A, Wolf JK, Smith JA. Evaluation of active hexose correlated compound (AHCC) in combination with PEGylated liposomal doxorubicin for treatment of ovarian cancer. Int J Appl Res Nat Prod. (2011) 4:6–11.
13. Matsui Y, Uhara J, Satoi S, Kaibori M, Yamada H, Kitade H, et al. Improved prognosis of postoperative hepatocellular carcinoma patients when treated with functional foods: a prospective cohort study. J Hepatol. (2002) 37:78–86.
14. Kawaguchi Y. Improved survival of patients with gastric cancer or colon cancer when treated with active hexose correlated compound (AHCC): effect of AHCC on digestive cancer. Nat Med J. (2009) 1:1–6.
15. Doorbar J. Host control of human papillomavirus infection and disease. Best Prac Res Clin Obstet Gynaecol. (2018) 47:27–41.
16. Wilson EB, Yamada DH, Elsaesser H, Herskovitz J, Deng J, Cheng G, et al. Blockage of chronic type I interferon signaling to control persistent LCMV infection. Science. (2013) 340:202–7.
17. Teijaro JR, Ng C, Lee AM, Sullivan BM, Sheehan KC, Welch M, et al. Persistent LCMC infection is controlled by blockade of type I interferon signaling. Science. (2013) 340:207–11.
18. Fujita T, Kimura Y, Miyamoto M, Barsoumain EI, Taniguchi T. Induction of endogenous IFN- alpha and IFN-beta genes by a regulatory transcription factor, IRF-1. Nature. (1989) 337:270–2.
19. Honda K, Tanguchi T. Toll-like receptor signaling and IRF transcription factors. IUBMB Life. (2006) 58:290–5.
20. Lace MJ, Anson JR, Haugen TH, Turek LP. Interferon regulatory factor (IRF)-2 activates the HPV-16 E6-E7 promoter in keratinocytes. Virology. (2010) 399:270–9.
21. Kimura T, Nakayama K, Penninger J, Kitagawa M, Harada H, Matsuyama T, et al. . Involvement of the IRF-1 transcription factor in antiviral responses to interferons. Science. (1994) 264:1921–4.
22. Kano A, Haruyama T, Akaike T, Watanabe Y. IRF-1 is an essential mediator in IFN-gamma-induced cell cycle arrest and apoptosis of primary hepatocytes. Biochem Biophys Res Commun. (1999) 257:672–7.
23. Lace MJ, Anson JR, Klingelhutz AJ, Harada H, Taniguchi T, Bossler AD, et al. . Interferon-beta treatment increases human papillomavirus early gene transcription and viral plasmid genome replication by activating regulatory factor (IRF)-1. Carcinogenesis. (2009) 30:1336–44.
24. Ho GYF, Bierman R, Beardsley L, Chang CJ, Burk RD. Natural history of cervicovaginal papillomavirus infection in young women. N Engl J Med. 338:423–8.
